Sistem RPA-CRISPR/Cas12a v tej študiji doseže hitro (30–40 min), ultra-občutljivo (1 kopija/µL) odkrivanje HCMV z usmerjanjem na zgodaj-izraženi gen UL123, s čimer prekaša običajne metode pri testiranju kliničnih vzorcev. Ta inovacija omogoča pravočasno diagnosticiranje okužb z nizko-virusno-obremenitvijo, zlasti pri pri bolnikih z oslabelim imunskim sistemom in poudarja izvedljivost diagnostike,-ki temelji na CRISPR, za izboljšanje obvladovanja bolezni,-povezanih s HCMV. Preprostost in učinkovitost preizkusa poudarjata njegov potencial kot-orodje za-oskrbo za-nastavitve z omejenimi viri.
Vzorci mest za ojačanje RPA in izbira kompleta.
(A) Zasnova primerja RPA glede na lokacijo fragmentov pomnoževanja. Puščice označujejo osnovne položaje od začetka do konca pomnoženega fragmenta s primerji P1-P6.
(B) Slika elektroforeze v agaroznem gelu produkta RPA, pomnoženega s 6 kompleti primerjev HCMV.
(C) Preverjanje učinkovitosti ojačanja kompletov RPA različnih podjetij. P: Primer, NC: negativna kontrola.
Rezultati so pokazali, da je komplet AmpFuture pokazal največjo učinkovitost ojačanja.
Primerjava pozitivnih stopenj MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Fluorescent Probe Method in qPCR v kliničnih vzorcih.
Zbrali smo vzorce krvi in urina pri 48 kliničnih bolnikih. Genomsko DNK smo ekstrahirali iz teh vzorcev z uporabo TIANamp Genomic DNA Kit, rezultate detekcije UL122 pa smo analizirali z metodo PCR-fluorescentne sonde. S primerjavo naših rezultatov s kliničnimi diagnozami so naše metode identificirale 6 pozitivnih vzorcev, ki so bili v kliničnih testih negativni.
